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六胺銀染色又稱 PASM 染色,是臨床常用的一種組織化學(xué)染色技術(shù),以下是關(guān)于它的詳細(xì)介紹:
染色原理:標(biāo)本經(jīng)高碘酸等氧化劑氧化后,使真菌和其他機(jī)會(huì)性生物的細(xì)胞壁內(nèi)的粘多糖以及組織基底膜內(nèi)的多糖暴露出醛基,醛基將六胺銀還原為黑色的金屬銀,從而使真菌、基底膜等被染成黑色。硫代硫酸鈉對(duì)已顯色的銀鹽起固定作用,并除去未反應(yīng)的銀離子。
染色步驟
切片預(yù)處理:石蠟切片進(jìn)行常規(guī)的脫蠟至水洗步驟,以去除切片上的雜質(zhì)和油脂,為后續(xù)染色做好準(zhǔn)備。
化學(xué)處理:將切片依次放入 5% 鉻酸水溶液處理 1 小時(shí),隨后用自來水沖洗 5 分鐘;再放入 1% 亞硫酸氫鈉水溶液中處理 30 分鐘,之后用自來水沖洗 3 分鐘,并用蒸餾水充分洗滌,以去除多余的化學(xué)物質(zhì)。
六胺銀染色:將預(yù)熱至 60°C 的六胺銀應(yīng)用液倒入染色缸中,將切片放入并染色 1 小時(shí)。期間需密切觀察切片顏色變化,當(dāng)切片呈現(xiàn)淡黃色且顯微鏡下觀察到淡棕色菌體時(shí),應(yīng)每隔 5-10 分鐘觀察一次,以精確控制菌體著色深淺,直至達(dá)到理想的顯色效果。隨后,用蒸餾水洗滌切片 5-6 次。
后續(xù)處理:將切片放入 0.1% 氯化金水溶液中調(diào)色 4 分鐘,再用蒸餾水洗滌 1-2 分鐘;接著放入 3% 硫代硫酸鈉水溶液中處理 5 分鐘,以進(jìn)一步穩(wěn)定染色效果。然后自來水洗 1 分鐘,蒸餾水洗 1 分鐘。
復(fù)染與封片:將切片放入淡綠染液中復(fù)染 20 秒,隨后用流水沖洗 20-60 秒以去除多余染液。最后,經(jīng)過 95% 酒精和無水酒精脫水、二甲苯透明處理,用樹膠封片,以備觀察。
2025-11-07
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