以下是關(guān)于 ATP 酶染色的相關(guān)介紹：

基本原理

ATP 酶是一種水解酶，可催化 ATP 分解產(chǎn)生能量。在 ATP 酶染色中，常用的是鈣鈷法，其原理是 ATP 酶水解 ATP 為 ADP 和磷酸，磷酸與鈣離子在酶活性部位結(jié)合形成無色的磷酸鈣沉淀，磷酸鈣經(jīng)氯化鈷處理形成磷酸鈷，再經(jīng)硫化銨處理便形成棕黑色的硫化鈷沉淀在酶活性部位，從而通過觀察沉淀的分布和顏色深淺來顯示 ATP 酶的分布和活性情況。

操作步驟

取材與冷凍切片：麻醉動物后，在偏離麻醉劑注射的位置選取肌肉取材部位，劃開皮膚及目標(biāo)肌肉，切下大小約為 10mm×5mm×5mm 的肌肉塊，將其置于用生理鹽水濕潤過的紗布上。把裝有異戊烷的離心管置于液氮中預(yù)冷至底部結(jié)霜，然后將肌肉塊浸入預(yù)冷好的異戊烷中，勻速順時針旋轉(zhuǎn) 40-60 次，再迅速將其置于封口袋中并放入液氮中保存。最后使用冷凍切片機對冷凍的肌肉塊進行切片。

試劑配制：配制預(yù)孵育液、增強洗液、孵育液、氯化鈷溶液及硫化銨溶液等試劑備用。其中預(yù)孵育液一般由乙酸鈉、巴比妥鈉、雙蒸水等原料混合而成。

染色處理：室溫下將切片置于預(yù)孵育液中處理 3-5min，處理完后取出切片并置入增強洗液中洗 15-30s，隨后將切片浸入孵育液中 37℃處理 25-30min，再將切片浸入氯化鈷溶液中處理 3-5min，取出后先用自來水沖洗數(shù)次，再用雙蒸水洗 4 次，隨后將切片浸入硫化銨溶液中處理 20-30s，最后流水沖洗，然后脫水封片。