一、染色原理

1、番紅O的染色原理：

番紅O是一種從藏紅花柱頭中提取的天然染色劑，為橙紅色粉末。它是一種結合多陰離子的陽離子染料，其顯示軟骨組織是基于陽離子染料與多糖中陰離子基團（如硫酸軟骨素或硫酸角質素）結合。

番紅O著色與陰離子的濃度近似成正比關系，間接反映基質中蛋白多糖的含量和分布。當軟骨受到損傷時，軟骨中的糖蛋白會釋放出來，使基質成分分布不均勻，從而導致番紅O淡染或不著色。

2、固綠的染色原理：

固綠是深綠色粉末或帶金屬光澤的顆粒。它是一種酸性染料，能溶于水和酒精。

固綠主要用于染含有漿質的纖維素細胞組織，如與軟骨下骨膠原纖維結合，呈現綠色且不易褪色。

二、材料與儀器：

實驗試劑：

無水乙醇、二甲苯、中性樹膠、改良番紅O-固綠軟骨染色試劑盒

實驗儀器：

LEiCA TP-1020脫水機、LEiCA HistoCore MULTICUT病理切片機、包埋機、凍臺、組織攤片機、烤箱、載玻片、蓋玻片、OLYMPUS CKX43-LP顯微鏡、3DHISTECHP250FLASH全景掃描儀

三、實驗步驟：

1、 石蠟切片脫蠟至水：

依次將石蠟切片放入

?二甲苯Ⅰ20min?二甲苯Ⅱ20min

?無水乙醇Ⅰ3min?無水乙醇Ⅱ3min

?90%乙醇3min?80%乙醇3min

?70%乙醇3min?蒸餾水洗

2、固綠染色：

將切片放入固綠染色液內浸染5min，快速用弱酸溶液洗滌切片10-15s，以便去除殘留的固綠，晾干。

3、番紅染色：

將切片放入番紅染色液內浸染5min。

4、脫水：

將切片按95%乙醇2-3s、無水乙醇2-3s，無水乙醇1min脫水。

5、透明封固：

切片放入二甲苯中透明，中性樹膠封片。

實驗結果：

嗜堿性的骨與堿性染料番紅O結合呈現紅色。

嗜酸性的骨和酸性染料固綠結合呈現綠色。

文章出自：番紅固綠染色實驗      想了解更多請關注：http://www.zj117.cn/